Hoechst 33258，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258。分子式為C₂₅H₂₄N₆O·3HCl，分子量為533.88，CAS Number 23491-45-4。
    Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。
    Hoechst 33258染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。
    Hoechst 33258的zui大激發(fā)波長為346nm，zui大發(fā)射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，zui大激發(fā)波長為352nm，zui大發(fā)射波長為461nm。
 

此染色液做成濃縮液和稀釋液主要是為了使用方便，因為濃縮液才1ml,解凍起來很快，實際也可以一次將濃縮液都加入稀釋液中，混勻使用。但如果一次使用量比較少，使用次數(shù)比較多，是適當(dāng)分裝一下，免得多次凍融。

使用說明：
Hoechst 33258染色液染色液的配制：將Hoechst 33258濃縮液取出解凍，輕輕混勻，短時間離心，根據(jù)使用量，按照1ml33258稀釋液加入20ul33258濃縮液的比例配制，即成Hoechst 33258染色液。此配好的染色液深度為10ug/ml,如果感覺染色顏色比較深，可適當(dāng)?shù)南♂專ㄓ孟♂屢海４伺浜玫娜旧何从猛昕纱娣庞?20℃避光。
1. 對于固定的細胞或組織：
   a. 對于細胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行Hoechst 33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的Hoechst 33258染色。
   b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。
   c. 吸除，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。
   d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。
2. 對于活細胞或組織：
   a. 加入適當(dāng)量，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100微升染色液。
   b. 在適宜于細胞培養(yǎng)的溫度培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進行熒光檢測。